Os indicadores biológicos autônomos para LTSF são constituídos por um frasco de plástico, cujo volume interior contém um disco ou portador de esporos e uma ampola de vidro com um meio de cultura e indicador de pH. Para processos de esterilização utilizando LTSF, o material usado para os discos é papel de filtro.

Os esporos são Geobacillus stearothermophilus da cultura ATCC 7953 de acordo com a norma EN ISO 11138-1.

Os indicadores biológicos autônomos para LTSF servem para verificar a letalidade microbiana dos processos de esterilização por LTSF. Eles são normalmente colocados na câmara em posições que sujeitam o equipamento a um desafio de processo e podem ser colocados tanto dentro de pacotes e de recipientes como com embalagem dupla. Quando o processo de esterilização tiver sido concluído, eles devem ser deixados a temperatura ambiente por cerca de 15 minutos antes da ativação. Não há riscos no manuseio uma vez que o processo de esterilização for concluído já que o plástico do frasco é composto de polímeros altamente resistentes à temperatura. É necessário usar luvas para manuseio.

A ativação ocorre com a quebra da ampola dentro do frasco através da incubadora. Ele deve ser colocado em um dos orifícios do centro e deve-se realizar um movimento lateral que quebre a ampola de forma rápida e fácil, sem ter que tocar o bloco de alumínio da incubadora.

Um controle positivo (não esterilizado) deve ser feito pelo menos diariamente para verificar a condição dos esporos da caixa em uso. A mudança de cor é de ROXO para uma cor AMARELA.